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目的基因与载体连接、 感受态制备及转化【实验原理】1；酶促生物化学反应过程 在一定的条件下，由DNA连接酶催化目的基因与载体相邻的5端磷酸与3端羟基之间形成磷酸二酯键的过程。相同或不同的限制性内切酶产生相同的粘性末端，在降至退火温度时，能重新互补结合，在DNA连接酶的催化下，目的基因与载体相连接。2；DNA连接酶的分类： T4 DNA连接酶：催化dsDNA粘末端连接及平端连接 大肠杆菌DNA连接酶：不能催化平末端连接,其底物只能是带缺口的双链DNA分子和具同源互补粘末端的不同DNA分子3；T4 DNA连接酶：来源 T4噬菌体感染的大肠杆菌 最佳pH值 7.27.8，常用的反应液为pH7.6 的Tris-HCl缓冲液 需ATP，Mg2+参加反应 二硫苏糖醇等巯基化合物可促进连接酶的连接 作用；高浓度的Na+、K+等抑制酶的活性。4；受体分类：受体细胞也称为宿主，是重组子扩增及表达的场所，分为原核细胞和真核细胞两类。5；应用：原核细胞：重组子复制扩增，外源基因表达系统 真核细胞：主要用于外源
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