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大鼠干扰素αIFNα检测试剂盒.DOC

1、TEL:021-60514606 Web:www.sh- Catalog #:95126大鼠干扰素 (IFN)检测试剂盒使用说明 本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T15.63-1000pg/mL灵敏度:6.0pg/mL使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中大鼠干扰素 (IFN )含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠干扰素 (IFN )水平。用纯化的干扰素(IFN) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入干扰素 (IFN ) 再与 HRP 标记的 干扰素 (IFN ) 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB

2、 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠干扰素 (IFN)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠干扰素 (IFN )浓度。 试剂盒1 30 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 6ml1 瓶2 酶标试剂 6ml1 瓶 8 标准品 1000pg/mL 0.5ml1 瓶3 酶标包被板 12 孔8 条 9 标准品稀释液 1.5ml1 瓶4 样品稀释液 6ml1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 6ml1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml1/瓶 12

3、密封袋 1 个标本要求 1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/ 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液:用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(200

4、0-3000 转/分)。仔细收集上清。5.培养细胞:TEL:021-60514606 Web:www.sh- Catalog #:95126检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4 ),或组织蛋白萃取试剂,

5、 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融8.不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。操作步骤1. 标准品:其浓度为 1000pg/mL(贮液) 。先将其稀释为 1000pg/mL标准曲线最高浓度)后,再准备 5 个稀释标准品的 EP 管,每个 EP 管中加入 150L 的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释 1000pg/mL,500pg/m

6、L,250pg/mL,125pg/mL,62.5pg/mL,31.2pg/mL,准品稀释液(0pg/ml)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液Tube 0 1 2 3 4 5pg/mL 1000pg/mL 500pg/mL 250pg/mL 125pg/mL 62.5pg/mL 31.2pg/mL1 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l,待测样品孔中先加样品稀释液 40l,然后再加待测样品 10l(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃

7、动混匀。1. 温育:用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 2. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用3. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。4. 加酶:每孔加入酶标试剂 50l,空白孔除外。 5. 温育:操作同 3。6. 洗涤:操作同 5。7. 显色:每孔先加入显色剂 A50l,再加入显色剂 B50l,轻轻震荡混匀,37避光显色10分钟.8. 终止:每孔加终止液 50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。9. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分

8、钟以内进行。操作程序总结:TEL:021-60514606 Web:www.sh- Catalog #:95126计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3各步加样均应使

9、用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n5)。5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.TEL:021-60514606 Web:www.sh- Catalog #:951268所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1试剂盒保存:;2-8。2有效期:6 个月

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