1、植物25羟基维生素D3（25(OH)D3）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T60ng/L -2500 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中 25 羟基维生素 D3（25(OH)D3）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物 25 羟基维生素 D3（25(OH)D3）水平。用纯化的植物 25 羟基维生素 D3（25(OH)D3 ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物 25 羟基维生素 D3（25(OH)D3 ） ，再与 HRP 标记的 25 羟基维生素D3（25(OH)D3 ）抗体结合，形成抗体-抗
2、原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物 25 羟基维生素 D3（25(OH)D3 ）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值） ，通过标准曲线计算样品中植物 25 羟基维生素 D3（25(OH)D3）浓度。 试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 6ml1 瓶2 酶标试剂 6ml1 瓶 8 标准品（4800ng/L） 0.5ml1 瓶3 酶标包被板 12 孔8 条 9 标准品稀释液 1.5ml1 瓶4 样品稀释液 6ml1 瓶 10 说明书
3、1 份5 显色剂 A 液 6ml1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求 1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融2不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2400 ng/L 5 号标准品 150l 的原倍标准品加入 150l 标准品稀释液1200 ng/L 4 号标准品 150l 的 5 号标准品加入 150l 标准品稀
4、释液600 ng/L 3 号标准品 150l 的 4 号标准品加入 150l 标准品稀释液300 ng/L 2 号标准品 150l 的 3 号标准品加入 150l 标准品稀释液150 ng/L 1 号标准品 150l 的 2 号标准品加入 150l 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l，待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品 10l（样品最终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。
5、4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标
6、，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5） 。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月
