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蒽酮-硫酸法测多糖2页.docx

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一.实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮(C14H10O)脱水缩合,形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸收,在150g/mL范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度,糖含量在30g左右就能进行测定。二.试剂器材蒽酮试剂:精密称取0.1g蒽酮,加80%浓H2SO4100mL使溶解,摇匀。当日配制使用;葡萄糖标准液:将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中,12hr后精密称取100mg,用蒸馏水定容至100ml;其他器材:分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。三.操作步骤样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围,精确吸取2mL置于干燥洁净试管中,在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL,振荡混匀,各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出,迅速浸于冰水浴中冷却15min,每个浓度做2-3个重复。在625nm波长下迅速测定各管吸光

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