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单细胞琼脂糖凝胶电泳(comet assay)Single Cell Agarose Gel Electrophoresis (SCGE)分析DNA损伤 DNA损伤增加-comet tail增大步骤:一、胞悬液的制备:1. 吸弃旧培养基,PBS冲洗2遍。2. 0.25%胰酶消化,待细胞变圆,间隙增大,立即终止消化,用弯头吸管轻轻吹打细胞,使成细胞悬液,加入离心管,1000rpm,25离心10min,弃上清,以1ml PBS悬浮细胞,(以上应在暗室及较低温度下进行)。各组收集细胞23106个(细胞悬液终浓度106个/ml),必须分散成单个。悬浮于1ml PH7.4 PBS中,此步在暗室及较低温度下进行。浓度要求:100L上胶中混30L细胞悬液,在100x镜下视野有10-15个细胞,细胞呈圆形,不皱缩。二、玻片制备:1. 玻片磨砂。2. 制备0.7%正常熔点琼脂糖(NMPA)和0.7%低熔点琼脂糖(LMPA)各20ml。用pH7.4 PBS配制。称0.14g溶于20mlPBS。( NMA与玻片附着不紧,可升高其浓度至0.7%,低浓
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