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植物体内可溶性蛋白质含量的测定方法:考马斯亮蓝G250染色法1.原理:考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(1100g),蛋白质与色素结合物在595nM波长下的光吸收与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速,其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应快速灵敏、易于操作、干扰物质少(考马斯亮蓝G250和蛋白质通过范德华力结合,受蛋白质的特异性影响较小,除组蛋白外,其他不同种类蛋白质染色强度差异不大),可测定微克级蛋白质含量,是一种比较好的蛋白质定量法。但此方法也存在其缺点,考马斯亮蓝在蛋白质含量很高时线性关系偏低,且不同来源蛋白质与色素结合状况有差异。2.仪器:721分光光度计;10ml量筒1个;研钵;烧杯;量瓶;移液管;1ml3支;5ml3支;10ml具塞刻度试管14支。3.试剂:90乙醇(无水乙醇20瓶
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