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基因克隆及转基因1、 基因克隆及转基因过程1、 设计引物软件是DNASTAR.Lasergene.v7.1,用到里面的PrimerSelect和EditSeq。一般原则:1、长度:18-25; 2、GC含量:40-60,正反向引物相差不要大于5%; 3、Tm值:55以上(到65),实在不行50以上也可以,正反向引物相差不要大 于5; 4、3端结尾最好是GC,其次是T,不要A; 5、正反向引物连续配对数小于4; 6、在NCBI上的Primer Blast上看引物特异性如何; (如果克隆的话不能满足条件也没办法。)不是必须条件,但可以考虑:多个基因设计引物时,可尽量使Tm值相似,方便PCR。步骤:一、打开PrimerSelect和EditSeq。二、在EditSeq中输入你的序列。引物有一对F和R1、对于F是从5到3,在序列的前部分选择长度为18-25bp的碱基,如
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