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大肠杆菌热击感受态细胞的制备、注意事项和转化3页.doc

大肠杆菌感受态细胞的制备和转化大肠杆菌感受态细胞制备的原理:大肠杆菌自然条件下很难进行转化,其主要原因是转化因子的吸收较为困难。在转化实验中,通常先采用人工的方法制备感受态细胞,代表性的方法之一是Ca2+诱导法。感受态形成后,细胞生理状态会发生改变,出现各种蛋白质和酶,负责供体DNA的结合和加工等。细胞表面正电荷增加,通透性增加,形成能接受外来的DNA分子的受体位点等。Ca2+诱导DNA对大肠杆菌细胞的转化:在0的CaCl2低渗溶液中,细菌细胞发生膨胀,同时CaCl2使细胞膜磷脂层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,诱导大肠杆菌形成感受态。Ca2+能与加入的DNA分子结合,形成抗DNA酶(DNase)的羟基-磷酸钙复合物,并黏附在细菌细胞膜的外表面上。当42热刺激短暂处理细菌细胞时,细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动,并随之出现许多间隙,为DNA分子提供了进入细胞的通道。一、 受体菌的培养从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该

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