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原生质体制备及转化1.去皮的日本晴种子在75%的酒精中消毒1 min。然后用2.5%的次氯酸钠消毒20 min。用无菌水洗至少5次，然后在1/2 MS培养基上，12 h光照（大约150umol m-1 s-1）十二小时黑暗，26 培养7-10天，提前一天烧好去尖的黄蓝枪头备用。2.取40-60棵水稻幼苗的茎和叶鞘的绿色组织。3.将一捆水稻植株（大概10棵幼苗）用剃刀一起切成大约0.5 mm的小段。4.将小片段立刻放进0.6 M的甘露醇中，黑暗中放置10 min。5.用100目钢制滤网去掉甘露醇，将小片段放在加入15mL酶液的25mL锥形瓶中，（1.5% Cellulase RS，0.75% Macerozyme R-10，0.6 M甘露醇，pH5.7的10mM MES，10mM CaCl2，0.1% BSA），28摇床中轻轻摇晃（50rpm），黑暗孵育4-6 h。6.此时配置40%的PEG4000，酶消化后，分三次加入等体积15mL的W5溶液（154 mM NaCl，125mM CaCl2,5 mM KCl，pH 5.7的2mM MES）。用手充分摇晃1
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