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糖苷酶实验指导.doc

-糖苷酶抑制剂抑制活性测定实验原理:食物中的淀粉(多糖)经口腔唾液、胰淀粉酶消化成含少数葡萄糖分子的低聚糖(或称寡糖)以及双糖与三糖,进入小肠经- 葡萄糖苷酶作用下分解为单个葡萄糖,为小肠吸收。在生理状态下,小肠上,中、下三段均存在 - 葡萄糖苷酶,在服用- 葡萄糖苷酶抑制剂后上段可被抑制, 而糖的吸收仅在中、下段,故吸收面积减少,吸收时间后延,从而对降低餐后高血糖有益, 在长期使用后亦可降低空腹血糖, 估计与提高胰岛素敏感性有关。对硝基苯-D-葡萄糖苷(pNPG)经-葡萄糖苷酶水解可产生对硝基苯酚,其在405nm呈特异性吸收,因此可以通过检测对硝基苯酚的生成量检测-葡萄糖苷酶的活性。仪器与试剂缓冲液:0.1M的磷酸钠缓冲液(pH6.8)-每100ml中1mol/l磷酸氢二钠4.6 ml,1mol/l磷酸二氢钠5.4 ml。酵母-葡萄糖苷酶:将100U/ml酶原液用0.1M的磷酸钠缓冲液(pH6.8)稀释为1U/ml的酶溶液,冷冻备用。底物pNPG配制:2mM的pNPG溶解于0.1M的磷酸钠缓冲液中。阿卡波糖抑制剂配制:200g/m

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