1、猪细小病毒（CPV ）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。 48T使用目的：本试剂盒定性测定猪血液、或其它相关组织中细小病毒（CPV） 。实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猪细小病毒（CPV） 。用纯化的猪细小病毒（CPV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中细小病毒（CPV）抗原相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的细小病毒（CPV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光
2、度（OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中猪细小病毒（ CPV）的存在与否。 试剂盒组成： 1 20 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 3ml1 瓶2 酶标试剂 3ml1/瓶 8 阳性对照 0.5ml1 瓶3 酶标包被板 12 孔4条9 阴性对照 0.5ml1 瓶4 样品稀释液 3ml1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 3ml1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 3ml1 瓶 12 密封袋 1 个标本要求： 1标本处理：血清、血浆标本可直接检测2标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20保存一个月，但应避免反复冻融。3不能检
3、测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤：1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 4. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤
4、液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50l，再加入显色剂 B 50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 15 分钟10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.15临界值（CUT OFF）计算：临界值= 阴性对照孔平均值 +0.15阴性判定：样品
5、 OD 值 临界值（CUT OFF ）者为细小病毒（CPV）阴性阳性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为细小病毒（ CPV）阳性注意事项1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物请避光保存。6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月
