1、 细胞水平 ELISPOT 原理： 本实验旨在测IFN-的分泌情况，T细胞受抗原刺激后分泌IFN-，同时被PVDF薄膜上特异抗体捕获。微孔盘中的细胞被移除并清洗后，被捕获的细胞激素可进一步使用生物素标记的二次抗体来标志，其后再以结合酵素的StreptAvidin与之作用，并加入酵素受质使其呈色，有反应作用的细胞会留下约10-20mm大小染色的斑点。 方法： （1）获得PBMC （2）IFN-诱导分泌：阳性对照品加入PMA，阴性对照不加刺激物。 （3）主要方法：处理PVDF孔板，在活化后预包被好抗体的平板中分别加入阴性PBMC及阳性PBMC，37孵育。第二天洗板后,加缓冲液后，孵育。清洗， 加入稀释的检测抗体，孵育1小时, 洗板后再加入亲和素碱性磷酸酶再次孵育。最后加入BCIP/NBT显色，倒去液体，将板倒置以免残留的液体流回膜上一旦膜干燥后，4下放置一夜后读取点数，计算待测样本中IFN-的含量，从而评估T细胞的功能。细胞内细胞因子染色原理：通过体外多克隆激活剂或特定的抗原激活T细胞，同时抑制IFN
