1、 小鼠Toll样受体4(TLR-4)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T0.7ng/mL - 26ng/mL使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中 Toll样受体 4(TLR-4) 含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠 Toll样受体 4(TLR-4) 水平。用纯化的小鼠Toll样受体 4(TLR-4)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 Toll样受体 4(TLR-4)，再与 HRP标记的 Toll样受体 4(TLR-4) 抗体结合，形成抗体- 抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB
2、 在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Toll样受体 4(TLR-4) 呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠 Toll样受体4(TLR-4)浓度。试剂盒组成12345630倍浓缩洗涤液酶标试剂20ml1瓶6ml1瓶12孔8条6ml1瓶6ml1瓶6ml1/瓶78终止液 6ml1瓶标准品（48ng/mL） 0.5ml1瓶酶标包被板样品稀释液显色剂 A液显色剂 B液9 标准品稀释液说明书1.5ml1瓶1份101112封板膜 2张密封袋 1个标本要求1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后
3、应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融2不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。24ng/mL12ng/mL6ng/mL5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150l的原倍 标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 5号标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 4号标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 3号标 准品加入 150 l标准品稀释液150l的 2号标 准品加入 150 l标准品稀释液3
4、ng/mL1.5ng/mL2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l，待测样 品孔中先加样品稀释液 40l ，然后再加待测样品 10l（样 品最终稀释度为 5倍）。加样 将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.4.5.温育：用封板膜封板后置 37温育30分钟。配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。6.7.8.9.加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。温育：操作同 3。洗涤：
5、操作同 5。显色：每孔先加入显色剂 A50 l，再加入显色剂 B50l ， 轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立 转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上 绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用 标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式， 计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷
6、藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释 一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6个月
