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酶活性的测定(共2页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上准确称取天山云杉种子0.1 g,先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0,内含1 mmol/ L EDTA),研磨成匀浆,然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中,4 ,10000 r/min 离心 20 min,上清液即为酶提取液,4 保存用于ROS系统酶活性分析。3 酶活性的测定3.1 过氧化物酶 (POD,EC 1.11.1.7) 活性的测定。按照 Chance 和 Maehly6的方法,并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0,内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL,2 % H2O2 1.0 mL,50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时,反应混合液先在 25 水浴中预热,立即加入0.1 mL酶液以启动反应,以缓冲液调零,测定OD470值,每隔 30 s读数一次。取 0 60 s 时间段,即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位,Ug-1。 计算公式: POD活性

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