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精选优质文档-倾情为你奉上【试剂与仪器】 1 小牛血清。2 双抗溶液(链霉素 100g+ 青霉素 100 单位)。3 DMEM 培养基。4 转染试剂( LIPOFECTAMINE 2000 )。5 细胞培养基( DMEM+10%NCS )。6 PBS 。7 无血清培养基。8 胰酶( Trypsin )。9 培养皿,移液管,量筒,恒温水浴箱,离心机, 15ml 离心管,微量移液器,荧光显微镜和 CCD 。【操作步骤】 1 转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为 90% 。细胞铺板在 0.5ml 含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。2. 对于每孔细胞,使用 50l 无血清 DMEM 培养基稀释 0.8g-1.0g DNA 。多孔操作可以批量制备。3. 对于每孔细胞,使用 50l DMEM 培养基稀释 1l-3l LIPOFECTAMINE 2000 试剂。 LIPOFECTAMINE 2000 稀释后,在 5 分钟内同稀释的 DNA 混合。保温时间过长会降低活性。
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