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茚三酮比色法-氨基酸含量的测定(共2页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上茚三酮显色法测定氨基酸含量原理茚三酮溶液与氨基酸共热,生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应,生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比,可通过测定570nm处的光密度,测定氨基酸的含量。 试剂与材料1.标准氨基酸溶液:配制成0.3mmol/L溶液。2.pH5.4,2mol/L醋酸缓冲液:量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液,加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH检查校正。3.茚三酮显色液:称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮,用10mL乙二醇甲醚溶解。茚三酮若变为微红色,则需按下法重结晶:称取5g茚三酮溶于1525mL热蒸馏水中,加入0.25g活性炭,轻轻搅拌。加热30min后趁热过滤,滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶,抽滤,用1mL冷水洗涤结晶,置干燥器干燥后,装入棕色玻璃瓶保存。还原型茚三酮按下法制备:称取5g茚三酮,用125mL沸蒸馏水溶解,得黄色溶液。将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解,一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中,不断出现沉淀。滴定后继续搅拌15min,然后在

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