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精选优质文档-倾情为你奉上第一部分:实验内容问题一、 建库前1.分离时我们需要注意什么吗?回答:分离时我们要小心吸取上清不能吸到中间的白细胞。移液枪不要碰到采血管。2.我们提取的DNA浓度过高是什么原因导致的?回答:正常提取的DNA的浓度为0.1到0.3ng/ul,如果浓度太高可能是DNA含有杂质可能是漂洗的时候没洗好,也有可能是样品问题,血浆分离时浆白细胞吸到血清中,细胞经高速离心时破裂细胞中的DNA游离到血浆中导致DNA浓度过高。二、 建库及定量1.我们文库构建后浓度很低?回答:文库构建浓度过低的因素很多,试剂没混匀、温度、操作问题、PCR扩增前的晾干步骤没晾干或管壁含有酒精抑制PCR的扩增等。解决:办法规范操作,晾干前观察管壁是否有酒精,控制温度在25度。2.接头污染了怎么办?回答:接头污染可能是操作当造成的,我们要及时消毒台面,加接头是要注意换手套3-4 个换一次手套。3. Qubit 定量不准确?回答:仪器本身有一个精确度会产生一定差异,但这是可以在接受范围内的。但要注意每次测试样品前要校准曲线用同一次配的染色液。
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