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人上皮中性粒细胞活化肽-78ENA-78ELISA试剂盒.DOC

1、上海西唐生物科技有限公司 电话:021-55229872 55229873 技术咨询:人上皮中性粒细胞活化肽-78(ENA-78)ELISA 试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 ENA-78/CXCL5 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 ENA-78 与单抗结合,加入生物素化的抗人 ENA-78,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在 450nm 处测 OD值,ENA-78 浓度与 OD 值成正比,可通过绘制标准曲线求出标

2、本中 ENA-78 浓度。试剂盒组成(2-8保存)酶标板(Coated Wells) 96孔 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate)12ml10标本稀释液(Sample Buffer) 12ml 20浓缩洗涤液(Wash Buffer) 50ml标准品(Standards):4ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMB Solution) 12ml第一抗体工作液(Biotinylated Antibody)12ml 终止液(Stop Solution) 12ml准备试剂与收集血样1. 收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝) 、细胞培养上清液、组织匀浆、尿液等尽早检测,2-8

3、保存 48 小时;更长时间须冷冻(-20 或-70 )保存,避免反复冻融。2. 标准品液配制:使用前加入 1ml 蒸馏水混匀,配成 4000pg/ml 的溶液。设标准管 8 管,每管加入标本稀释液 300ul。在第一管中加入 4000pg/ml 的标准品溶液 300ul 混匀后用加样器吸出300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出 300ul 弃去。第八管为空白对照。3. 10标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释(示例:1ml 浓稀释液+9ml 蒸馏水) 。4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)检测程序1. 加样:每孔各加入

4、标准品或待测样品 100ul,将反应板充分混匀后置 37120 分钟。2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。3. 每孔中加入第一抗体工作液 100ul。将反应板充分混匀后置 3760 分钟。4. 洗板:同前。5. 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置 3730 分钟。6. 洗板:同前。7. 每孔加入底物工作液 100ul,置 37 暗处反应 15 分钟。8. 每孔加入 100ul 终止液混匀。9. 30 分钟内用酶标仪在 450nm 处测吸光值。结果计算与判断1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。2. 以标准品 2000、1000 、500、250、1

5、25 、62.5、31.2、0 pg/ml 为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 ENA-78 含量。试剂盒性能1. 灵敏度:最小的 ENA-78 检测浓度小于 15pg/ml。2. 特异性:可同时检测重组或天然的人 ENA-78。不与人其它细胞因子有交叉反应。3. 重复性:板内、板见变异系数均小于 10。注意事项1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。3. 板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。4. 本试剂盒宜置 4oC 冰箱保存。5. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

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