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PCR的经验总结 中心实验室内容提要: PCR的简介 PCR的原理 PCR的操作步骤 PCR的结果分析 相关PCR技术简介PCR的简介: 1983年 Kary Mullis发明 1985年 开始有文章发表 1993年 获诺贝尔奖 广泛用于分子生物学领域PCR的简介: 聚合酶链式反应,简称PCR( Polymerase Chain Reaction ),指在引物指导下由酶催化 的对特定模板(克隆或基因组 DNA)的扩增反应,是模拟体 内DNA复制过程,在体外特异 性扩增DNA片段的一种技术, 在分子生物学中有广泛的应用 ,包括用于DNA作图、DNA测序 、分子系统遗传学等。PCR的原理:PCR的操作步骤标准的PCR反应体系 10扩增缓冲液10l 4种dNTP混合物各200mol/L 引物10100pmol 模板DNA 0.12g Taq DNA聚合酶2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至100lPCR的反应流程: 温度与时间的设置: 变性温度与时间:一般9395,1min足以使 模板变性,若低于93则需延长时间,但温度过 高对酶的活性有影响。引物10100pmol 退火(
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