1、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR) 检测梅毒螺旋体梅毒螺旋体是梅毒的病原体,侵人人体 48h 后,血液中即可产生特异性抗体,2 周后即可用免疫学方法测出。最初可测出 IgM 抗体,继之可检出 IgA 和IgG。除 IgM 外,其他抗体可在机体内长期存在。梅毒螺旋体感染人体后,患者血清中可出现两类抗体:一类为抗密螺旋体的特异性制动抗体,当有补体存在和厌氧条件下对活体梅毒螺旋体有制动作用,并能将螺旋体杀死或溶解;另一类则是由梅毒螺旋体破坏人体组织过程中所释放的一种物质心磷脂刺激机体产生的。此类抗体能与广泛分布于生物组织中的类脂质抗原发生非特异反应,故称为反应素。反应素对机体无保护作用。检测方法
2、凝集法方法学原理 梅毒螺旋体在破坏组织过程中被损伤的组织释放出一种心磷脂,可刺激机体产生心磷脂抗体。这种抗体又叫反应素,它可与从牛心提取的心磷脂发生交叉反应。自牛心提取的心磷脂加上卵磷脂(增加心磷脂反应原)、EDTA(可使抗原稳定)和氯化胆碱(化学灭活作用) ,且将抗原吸附于活性炭粒上(便于结果观察)。当此种抗原与被检血清混合时,如被检血清中有梅毒反应素,则可出现肉眼可见的凝集,此为阳性反应;如无梅毒反应素则不凝集,为阴性反应。标本准备 静脉抽血 2ml,不抗凝。试剂 1RPR 抗原 吸附于活性炭的类脂质抗原。2RPR 卡片 印有直径 18mm 圆圈的特制涂料卡片。3塑料加液滴管(每滴 50u
3、1)。检测步骤 1取待检血清 50ul,加入卡片上圆圈内,并分散到整个圆圈,同时设阴性对照、阳性对照各 1 孔。2在每份血清及阴、阳性对照上滴加 1 滴 RPR 抗原。3旋转摇动 8rain(约 100rmin),立即用肉眼观察结果。正常参考值 正常为阴性结果判断 阴性对照不凝集,阳性对照应出现肉眼可见的明显凝集颗粒或絮片。根据标本中颗粒的大小及有无,判断阳性反应(+) 或阴性。如有需要也可将标本作若干倍稀释后,按上述方法做半定量试验。结果以发生阳性反应的被检血清最大稀释倍数报告。注意事项 1本试验应在室温环境 2329条件下进行。2抗原与被检血清要充分混匀,如从冰箱中取出应复温后再做试验。3
4、标本存放不当(如细菌污染或溶血),易出现假阳性。4抗原与被检血清混匀后 8min 观察结果,延长时间易出现假阳性。5某些地方性密螺旋体所致疾患如品他及雅司病时,本试验亦呈阳性。临床意义 VDRL、USR、RPR 同属非特异性试验,用以检测梅毒患者血清反应素。阳性见于梅毒密螺旋体感染。在下疳早期血清试验阴性时称血清阴性下疳,下疳后期血清试验阳性,称血清阳性下疳。下疳 12 周和 2 期梅毒阳性率可达 100,晚期梅毒阳性率为 7080。由于机体在感染梅毒螺旋体后,血清反应素在第 1 期梅毒病灶出现后 12 周即可开始测出,在梅毒第 2 期患者血清反应素滴度最高,试验阳性率几乎可达100。第 3 期梅毒患者的阳性率相对较低,经药物治疗后血清反应素首先转阴。由此可见,血清反应素变化曲线与梅毒临床过程一致。故本试验不仅对疾病的早期诊断有用,还可应用于梅毒患者的疗效监测。本类试验虽敏感性较高,但所用抗原是非特异性类脂抗原,除梅毒病以外,其他螺旋体病(雅司、回归热) 、麻风、红斑狼疮、非典型肺炎、类风湿性关节炎、肝硬化等亦可查出反应素,称梅毒血清生物学假阳性。故对结果的解释应加以注意。