1、魏氏梭菌毒素酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。96T使用目的：本试剂盒用于测定相关样本中魏氏梭菌毒素表达。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中魏氏梭菌毒素表达。用纯化的魏氏梭菌毒素抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中魏氏梭菌毒素相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的魏氏梭菌毒素抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中魏氏梭菌毒素的存在与
2、否。试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 6ml1 瓶2 酶标试剂 6ml1 瓶 8 阳性对照 0.5ml1 瓶3 酶标包被板 12 孔8 条 9 阴性对照 0.5ml1 瓶4 样品稀释液 6ml1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 6ml1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求 1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融2不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤1. 编号
3、：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 7
4、. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。操作程序总结：计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值= 阴性对照孔平均值 +0.15阴性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF ）者为魏氏梭菌毒素阴性阳性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为魏氏梭菌毒素 阳性。 注意事项1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物请避光保存。6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月
