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精选优质文档-倾情为你奉上提蛋白及WB的步骤整个过程细胞或蛋白都必须放冰上准备工作：前一天准备：借钥匙、检查细胞裂解液相关试剂是否充足、当天准备：洗玻璃板、开紫外，冰块、碎冰、标记1.5ml 离心管及0.6ml离心管、细胞刮板、开低温高速离心机细胞裂解液配制：1ml cell lysis10ul NP-40（离心机后）25ul 焦磷酸钠40ul NaF1ul -甘油磷酸2 ul Na3VO41ul 蛋白酶抑制剂（用完即放回冰箱）10ul PMSF（最后加，随加随用，有毒）细胞裂解和收集1. 观察细胞状态，并准备提蛋白：吸走培养基、用PBS洗细胞两次（倾斜贴壁加PBS，左右轻轻摇），倾斜贴壁吸走PBS。2. 将细胞盘拿到外间冰上，加裂解液（体积网上推荐：一般106加0.1ml ），冰上静置1-2min。3. 刮细胞：细胞刮板每次用之前拿水涮一涮，甩干，然后从中间到外面打圈刮，再从下往上，从上往下全面刮，（刮的时候要迅速），最后用枪吸取裂解液至离心管。细胞破碎4. 超声波破碎细胞：准备三个小烧杯，
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