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第五章 目的基因导入受体细胞 外源目的基因与载体在体外连接重 组后形成重组DNA分子,该重组DNA 分子必须导入适宜的受体细胞中方 能使外源目的基因得以大量扩增或 表达。外源DNA 载体DNA 重组分子 原核细胞 真核细胞 扩增或表达 表达 连接 转化或转导 电穿孔或显微注射 受体细胞 基因的重组与转移 DNA体外连接应注意的事项: 1. 插入片段与载体的酶切位点互补 相同的粘性末端才能有效地连接。 尽量避免平端连接。 决不能进行非互补粘性末端连接。 第一节、DNA片段的体外连接EcoRI EcoRI EcoRI (1)用相同的酶切 (2)用同尾酶切 BamHI、BclI、BglII、Sau3A、XhoII 都产生GATC4个碱基的粘性末端。2. DNA插入的方向正确 (1)用双酶切 由于产生的粘性末端不同, 只能以固定方向连接。 EcoRI BamHI EcoRI BamHI EcoRI BamHI 当外源DNA以非定向的方式插入克隆载体时,需 用测序或酶切的方法确定插入方向,上述两种方 法或昂贵或费力。一种快速、简便的PCR法,即 利用载体的通用引物和目的片段的两个特异性引 物直接
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