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第五节 目的基因与载体连接 基因工程之二、 目的基因与载体的连接（接） 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际 目的基因与运载体的结合过程，实际 上是不同来源的基因重组的过程。 上是不同来源的基因重组的过程。 （主要有以下4种连接方式） 1) 粘性末端连接 2） 平头末端连接 3） 人工接头法 4） 同源多聚尾连接法工具酶：基因工程中的工具酶主要包括用于DNA和RNA分 子的切割、连接、聚合、逆转录等相关的各种酶类。 几种重要的工具酶 活性 限制性核酸内切酶 识别特异碱基序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA5-磷酸与3-羟基 形成磷酸二酯键 DNA聚合酶 以DNA为模板合成DNA 逆转录酶 以RNA为模板合成cDNA 碱性磷酸酶 切除5末端磷酸 T4多聚核苷酸激酶 催化核酸5-羟基磷酸化 末端脱氧核苷酸转移酶 催化3-端合成同聚尾 DNA连接酶 E. coli DNA 连接酶 只能催化互补粘性 末端之间的连接 DNA 连接酶（DNA ligase）能催化双链DN
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