1、实验三实验三 细胞骨架标本的制备及观察细胞骨架标本的制备及观察 一、实验目的一、实验目的 1. 掌握细胞骨架的显示方法的原理。 2熟悉光学显微镜下细胞骨架的基本形态结构。 3. 了解细胞骨架标本的制备方法。二、实验材料二、实验材料 洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、 pH7.2 PBS（无钙镁磷酸缓冲液）、（无钙镁磷酸缓冲液）、 pH6.5 PBS、 M-缓冲液缓冲液（ 10原液）、原液）、 1%
2、TritonX-100、 2%TritonX-100、 3%戊二醛液、戊二醛液、 0.2%考马斯亮兰染液。考马斯亮兰染液。三、实验原理 细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维构成的网络结构。当用适当浓度的 TritonX-100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子去垢剂）处理细胞时，可将质膜中及细胞内许多蛋白质溶解，而细胞骨架系统的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质染料）染色后，可使细胞骨架蛋白着色而显示骨架显微结构。由于骨架系统中有些纤维（如微管）在该实验条件下不够稳定，而有些类型的纤维太细，在光镜下无法分辨，因此显示看到的主要是微丝组成的微丝束。采用活体染色等方法制备细胞骨架标本
3、，加强动手能力和了解临时制片的方法。四、实验方法 1. 洋葱鳞茎表皮细胞细胞骨架标本制备 （ 1） 撕取约 55mm大小的洋葱鳞茎中层鳞片的内表皮，浸入 pH6.5 PBS中 5min后，再放入盛有2%TritonX-100液的小瓶中， 37 处理 20 30min，以溶解掉细胞骨架以外的蛋白质。 （ 2） 用吸管吸尽 2%TritonX-100液，加入 M-缓冲液洗涤 2 3次，每次 5min，以使细胞骨架稳定。 四、实验方法 （ 3） 吸弃 M-缓冲液，加人 3%戊二醛固定液，固定 10min，再用 PBS洗 2 3次，每次 3min。 （ 4） 吸尽缓冲液，加 0.2%考马斯亮兰染液，染色 8 10min，再用 PBS洗 2 3次，每次 3min。 （ 5） 取出洋葱鳞茎表皮，平展于载玻片上，盖上盖玻片即可观察。五、结果与分析 光镜下可见洋葱鳞茎表皮细胞的胞质着色极淡，其中被染成深蓝色的网状结构即为细胞骨架 微丝 ，有的细胞中在核的周围还可见有些放射状分布的细丝。六、作业 1. 细胞骨架显示方法的原理是什么？ 2. 绘制细胞骨架显微图。
