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阳性克隆的快速检测 一、实验目的 学习蓝白斑筛选试验中阳性克隆的快速 检测方法 掌握蓝白斑筛选的原理和方法二、蓝白斑筛选的原理 重组质粒转化细菌后，蓝白斑筛选往往是基于抗 生素筛选基础上的第二次筛选。 一般培养转化细菌的培养基中都要加入一定浓度 的适宜抗生素，只有含有质粒载体的细菌才可以生长 形成菌落，即抗生素完成对细菌是否含有质粒载体进 行了初步筛选。 质粒载体上存在的LacZ基因片段当被外源DNA 片段插入时，会产生白色的克隆，不含插入片段的质 粒进入宿主细胞生成蓝色菌落。这就是蓝白斑筛选， 即a-互补显色反应lacZ -半乳糖苷酶 分解乳糖 i P O 调控蛋白P 大肠杆菌的-半乳糖苷酶基因lacZ系统a-互补显色反应（蓝白斑筛选） lacZ - -半乳糖苷酶 - 分解乳糖 i P O 调控蛋白P -肽段 分解X-gal 产物呈现蓝色 诱导剂IPTG -半乳糖苷酶基因lacZ突变体M15三、实验材料、器具及药品 v实验器具 1.5ml Ep管，离心管架，微量取液器，台式高速 离心机，恒温振荡摇床，电泳仪，紫外透射检测仪 。 v实验材料 LB固体培养基上生长的蓝白菌斑v实验药品 1
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