精选优质文档-倾情为你奉上农杆菌的转化流程 方案一1. 农杆菌的培养及感受态的制备 农杆菌菌株划YM平板，26-28培养48 h； 挑取单菌落接种到40 ml 无抗生素的YM液体培养基中，250 r/min， 26-28悬浮培养12-16 h； 将菌液转入灭过菌的50 ml离心管中，4，8000 r/min,离心8 min； 弃上清，加入用100 mM NaCl (4预冷)重悬收集的农杆菌； 4，8000 r/min, 离心8 min； 弃上清，加入原始菌液1/50体积（800m l/管（此时的感受态农杆菌可以直接用于转化）并分装成100m l）的20 mM CaCl2重悬菌体； 置液氮中10 s，放入-20冰箱中保存备用。2.农杆菌的转化（冻融法）将感受态农杆菌置于冰上，加入1mg质粒DNA（体积不宜超过10 m l），充分混匀，冰上放置30 min； 置液氮中快速冷却约1min后迅速转入37水浴中，待其融化； 加1 ml 无抗生素的YM 液体培养基于28，230 r/min 培养2-4 h；
