精选优质文档-倾情为你奉上细胞冷冻与复苏是细胞培养的常规工作，可以解决细胞因为连续继代造成的退变或转化。细胞的原代培养和传代培养以及细胞冻存和复苏后都需要细胞计数。一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene5000-0020)、0.4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)2、冷冻保存方法：(1)传统方法: 冷存管置于410分钟-2030分钟-801618小时(或隔夜)-液氮槽vaporphase长期储存。-20不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80冰箱中，惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1-3/分钟之速度由室温降至(-80以下)-120，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。3、步骤：(1)冷冻前24-
