建立分析方法色谱分离度与分离性能HPLC分离的机理色谱工作者关心的基本问题 - 色谱峰之间的分离度totRAmAUtimetRBR = 分离度tRA = 组分A的保留时间tRB= 组分B的保留时间w = 峰的基线宽度w1/2=半峰宽分离度值等梯度洗脱的基本分离度公式N: 总的理论塔板数; 柱效k: 容量因子 (保留因子), 色谱峰的保留作用：色谱峰的相对分离程度; 选择性作用影响分离度的因素容量因子对分离度的影响容量因子 - 流动相组成的影响选择性影响选择性的参数降低 增加 较弱的溶剂 较强的溶剂异丙醇/水 甲醇/水 乙腈/水C-2C-18容易超载不容易超载改变流动相组成改变固定相有机成分含量低的固定相 有机成分含量高的固定相色谱柱温度对分离度的影响柱效计算柱效典型的流速值4.6 1-23.0 0.4-0.82.1 0.2-0.41.0 0.05-0.09柱内径 mm(5um 粒度)mL/minflow rate2 =i.d.2i.d.12flow rate1柱外体积的影响10 L20 LTime, min.2.1 x 150 mmF = 0.2 mL / min. 样品体积 连接管路
