PCR 技术的原理与方法 钟召迪PCR定义l 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称，是一项在短时间内大量扩增特定的片段的分子生物学技术。l 是指在DNA 聚合酶的催化下，以母链DNA 为模板，一特定引物为延伸起点，经过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出于母链模板DNA互补的子链DNA的过程。l 可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等。PCR反应特点l特异性强l灵敏度高l简便、快速l对标本的纯度要求低PCR技术的基本原理lPCR的反应成分lPCR的反应基本步骤lPCR的反应体系PCR的反应成分l模板DNA l引物l四种脱氧核糖核苷酸lDNA聚合酶l反应缓冲液，Mg2PCR的反应基本步骤lPCR的反应基本步骤l变性：高温使双链DNA解离成单链（94 ，30s）l退火：低温下，引物与DNA模板互补区结合（55 ， 30s ）l延伸：中温延伸，DNA聚合酶催化以引物为起点的DNA链延伸反应（7072 ，3060s）PCR的反应体系 10扩增缓冲液 1/10体积 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 (2个) 0.2umol/L
