实验报告等电点聚焦测蛋白质等电点 1 / 4 等电点聚焦测蛋白质等电点 1. 了解蛋白质的两性解离性质和等电点聚焦的原理； 2. 学习测定蛋白质等电点的方法并掌握圆盘电泳技术。 二. 实验原理 等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，IEF 实质 就是在稳定的 pH 梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。 在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的 结果，在两极之间逐步建立起稳定的 pH 梯度，当蛋白质分子或其它两性分子存 在于这样的 pH 梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最 终到达一个使其表面静电荷为 0 的区带，这时的 pH 则是这种分子的 pl。聚焦在 等电点的分子也会不断地扩散。一旦偏离其等电点后，由于 pH 环境的改变，分 子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向 pl 迁移。因此，这些分子总是处于不 断地扩散和抗扩散的平衡之中，在 pl 处得以聚焦。 三. 实验步骤 1. 凝胶制备 按表 1 的比例配制 4ml 工作胶液，在真空干燥器中抽气 10mi
