PCR 常见问题、原因分析及其对策主讲人：欧阳志荃PCR技术简介PCR常见问题、原因分析及其解决方案提高PCR反应特异性的策略主讲内容PCR技术简介PCRPCR标准反应体系标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH2O 耐热聚合酶反应体系对PCR扩增的影响DNA模板纯度 蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物浓度 加量过多导致非特异性扩增增加特异性 长度适当、避免二级结构和二聚体完整性 避免反复冻融浓度 应适当,过高导致非特异性增加,过低则引 物扩增产物太少反应体系对PCR扩增的影响反应BufferBuffer pH值,盐离子浓度稳定剂,增强剂Mg 2浓度过高非特异性严重过低无扩增产物dNTP dNTP Mixture Mixture浓度适当避免反复冻融ddH2OpH值适当避免污染PCRPCR标准反应体系标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 Mg 2 dNTP ddH2O 耐热聚合酶如何选择最合适最合适的DNA聚合酶 DNA 聚合酶的特性 PCR 实验的不同需求如何选择最合适最合适的DNA聚合酶 DNA 聚合酶的特性纯 度稳
