引物设计实例分析引物设计基本原则 引物长度（primer length） 产物长度（product length） 序列Tm值 (melting temperature) G+C含量（composition） 引物二聚体及发夹结构 （duplex formation and hairpin） 阅读框1. 引物的长度 一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74 ，即Taq酶的最适温度2.产物的长度 扩增片段长度为100600碱基对.3. Tm值 引物的Tm值一般控制在55-60度, 尽可能保证上下游引物的Tm值一致,一般不超过2度. 如果引物中的G+C含量相对偏低,则可以使引物长度稍长,而保证一定的退火温度. Tm=2(A+T)+4(C+G)4. 引物的GC含量 有效引物中(G+C)的比例为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。5. 引物自身 引物间3端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败 1.打开软件，调入序列 2、选择路径，选择序列文件名，加入右框 3、序列文件显示如图，点击“pri
