真核生物基因组总DNA的提取与鉴定ppt课件.ppt

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基因组DNA的分离与纯化一、酚抽提法的原理 以含EDTA、SDS的裂解液裂解细胞,经蛋白酶K消化后,用PH8.0的Tris 饱和酚抽提蛋白质,离心后取上层水相,无水乙醇沉淀DNA。二、技术路线破 膜提 纯沉淀、洗涤细胞膜碎片,细胞器,脂、蛋白质,DNA,RNA 去除脂、蛋白质 浓缩DNA、去盐杂质真核生物基因组DNA的提取(一)1.低渗去除红细胞2.裂解白细胞真核生物基因组DNA的提取(二)3.酚抽提4.无水乙醇沉淀500l真核生物基因组DNA的提取(三)5.DNA沉淀的洗涤与干燥6.DNA溶解与电泳鉴定三 结果 琼脂糖凝胶电泳鉴定EB与DNA的结合EB可嵌入到碱基平面,使核酸在 UV 激发下发出桔红色荧光。三 结果 琼脂糖凝胶电泳鉴定The End裂解液的作用裂 解 液EDTASDS乙二胺四乙酸(络合物)二价金属螯合剂,抑制DNA酶十二烷基磺酸钠(去污剂)使细胞膜破裂;将核酸释放出来;使蛋白质变性Tris -HCl缓冲夜,维持稳定的pH值(8.0)DNA酚抽提法示意图酚的作用酚可以使蛋白质变性沉淀、抑制DNA酶活性。PH8.0的Tris溶液可以使抽提出的DNA进入水相 。DNA酚抽提

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