第十五章聚合酶链式反应 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个ephendof管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍。PCR 的特点v 灵敏度高1. 皮克(pg=10-12)量级扩增到微克(ug=10-6)水平2. 能从100万个细胞中检出一个靶细胞3. 病毒检测的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位) 4. 细菌检测的最小检出率为3个细菌v 简便、快速1. 一次性加好反应液,24 小时完成扩增2. 扩增产物一般用电泳分析v 对标本的纯度要求低u 血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗提DNA1、设想 1971年,Khorana提出:经过DNA变性,与合适引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。 但由于测序和引物合成的困难,以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以,Khorana的设想被人们遗忘了PCR 技术简史2、PCR的实现 1985年