Applied Biosystems 3730/3730 xlDNA AnalyzersDNA测序分析常见问题整理测序结果峰图四色图谱：每一种颜色对应一种碱基A T C G 引物 DNA 模板 纯化 困难模板 机器影响 影响测序质量的主要因素 一、引物对测序结果的影响 引物合成时多（少）一个碱基 引物不纯 模板上没有引物结合位点 引物二聚体 双引物结合合成时部分引物多一个碱基合成时部分引物少一个碱基 现象：每个峰后面有个同样荧光信号的小“ 尾巴” 。 原因：合成时引物多一个碱基。 对策：重新合成引物 现象：每个峰前面有个同样荧光信号的小“ 尾巴” 。 原因：合成时引物多一个碱基。 对策：重新合成引物引物（模板）不纯 现象：整个峰图噪音都比较高。（区别与小片段的干扰） 原因：引物（模板）纯度太低，含有较多杂质 对策： 建议使用HPLC （柱子纯化）或PAGE 纯化的测序引物。 脱盐纯化的引物纯度较低，适合做普通PCR ，但不建议用来测序。模板上没有引物结合位点 现象：没有特异性的测序峰图 原因：引物无法结合模板 对策重新设计引物引物二聚体 现象：前面100 多bp 噪音高，后面正常（引物
