考马斯亮蓝法测定考马斯亮蓝法测定 蛋白质含量蛋白质含量一、实验目的。掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质的原理与方法。熟练分光光度计的使用和操作方法。 双缩脲法和Folin 酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的 蛋白质溶液测定的方法。 1976 年由Bradford 建立的考马斯亮兰法（Bradford 法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮蓝法出现背景二、实验原理考马斯亮兰G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm 变为595nm ，溶液的颜色也由棕红色变为蓝色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm 下测定的吸光度值，与蛋白质浓度成正比实验优点（1 ）灵敏度高。据估计比Lowry 法约高四倍，蛋白质染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry 法要大的多。（2 ）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要
