1、氢化物发生原子吸收法测定血液头发中痕量硒林文业 何秉忠 黄鹂娟 赵士钧 黄桂宽 吴继同 张丽兰（广西分析测试研究中心） （广西冶金研究所） （广西医学院）在硒的生物化学作用被逐渐认识的今天,要求提供精确的分析数据.由于经典的荧光光度法测定硒,条件比较苛刻,本文采用氢化物发生原子吸收法测定了人体、全血头发样品中硒的含量。在确定了仪器的最佳工作条件的基础上,着重研究了测定全血,头发样品中硒的前处理方法及干扰试验.本法相对标准偏差小于 0.5%,标准加入回收率在 95.7102%之间,适用于开展流行病学调查和临床分析的研究.实验部分一 仪器及工作条件 日立 Z-6000 型原子分光光度计硒空心阴极灯
2、(北京有色金属研究总院产)日立 HFS-2 型氢化物发生装置耐热石英管(长沙产,规格:长 120mm,内径 11mm).波长 196.0nm,灯电流 5mA,狭缝 1.3nm,空气流量 1.00kgcm-2, 乙炔流量 0.05kg cm-2 ,测量方式直示,计算方是用峰高,校准曲线或标准加入方法曲线,计算时间 13s,延迟时间 0.5s,进样量3ml,载气流速 Ar100mlmin-1 ,进样时间 30s,反应时间 15s.二 试剂 硒(IV)标准贮备液:1000ugml -1,由高纯硒粉配置. 硒中间标准溶液 5ugml-1.硼氢化钾:1.5%溶液中含有 0.1%的氢氧化钠,用时现配.亚沸
3、蒸馏水三 试样处理准确取 0.20ml 血液试样或 0.2000g 头发试样于 20ml(12mm)刻度石英试管中,加入 2ml 浓HNO3,放置过夜,次日在加入 0.5mlHClO4,置于 160C 恒温沙浴中加热消化至溶液成呈淡黄色后(约 4h),加入 1mlH2O2,继续加热消化至溶液清亮(约 1h)取出,测定前用 HCl(30%)溶液定容.于试样处理的同时制备试剂空白.四 校准曲线的绘制1 校准曲线用微量定量取样器吸取硒中间表准溶液,0,10,30,50 和 70ul 分别放入 50ml 量瓶中,用 HCl(30%)溶液稀释到刻度,获得浓度分别为 0,1.0,3.0,5.0 和 7.0
4、ngml 硒的标准系列溶液.2 标准加入法曲线移取 10ml 试样+10mlHCl(30%):10ml 样液+10ml 2ngml-1 硒标准溶液; 10ml 样液+10ml 10ngml-1 硒标准溶液; 10ml 样液+10ml 14ngml-1 硒标准溶液,制成均含 HCL(30%)溶液的硒标准加入法系列溶液.结果与讨论 一 式样前处理方法的考察试样的前处理是至关重要的.目前测定硒的前处理方法普遍采用湿法消化,常用的分解装置有高型烧杯,三角锥瓶,高压分解坩锅和配有回流冷凝器的凯氏烧杯.由于前两种装置分解式样时,使用的酸量较大,硒易挥发损失,而且这些方法得消化液均需要转移定容,易引起较大的
5、误差.本法采用刻度石英试管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl 氧化还原体系,于 160C 恒温沙浴中消化血液头发试样.由于石英试管上端能起到空气的冷凝回流作用,因而试剂不易挥发,试样消化完全.与配有冷凝管的烧瓶消化法比较,具有操作简单,试剂和式样用量少,减少转译的误差等优点.本法与水冷凝管的凯氏烧瓶消化法比较的结果见表 1.表 1 分解方法的比较本法 水冷凝管烧瓶法统计参数*全血(ngml-1 )头发(ngg-1 )全血(ngml-1 )头发(ngg-1 )X+SD 144.5+6.9 66.5+13.0 145.0+7.1 664.8+14.4N 50 50 50 50RSD% 4.8
6、 2.0 4.9 2.2* X: 硒的平均值 n: 测定次数 SD: 标准偏差 RSD:相对标准偏差二 常见共存例子的干扰试验我们调查了存在于血液,头发中的 25 种共存例子对痕量硒测定的干扰试验,结果表明,下述离子(ug ml-1)不干扰 5ngml-1 硒的测定:Ca(700), Na 、Fe 3+(500), Mg、K(200), Cu、Zn(5),Ni、Mn 、Al(1), Cr6+、Co(0.2), Mo、As 3+、Bi、Sr 、Ti、Hg、Sn 2+ (0.1),Si、Ba(0.5),Pb(0.06),Cd(0.05)以及 NO3-、ClO4 -、H2O2(0.5M).锑()0.
7、05 ugml-1 不干扰,含量0.1 ugml-1 有负干扰,但血液头发中锑的含量一般都低于此值,再者经过了相对的稀释,它不会给本法测定硒带来影响.当 HNO3、HClO4、H2O2 的浓度小于0.5M时也不干扰测定.原因是盐酸介质保持了较佳浓度,可是试样中的 Fe、Cu 和 Ni 等重金属元素形成络合物避免其干扰 (1) ,这些与文献 (3) ,报道是一致的.另外还采用低浓度硒的校准曲线,使试样中基体元素的浓度得到相对稀释(100 倍以上),因而更有效地消除血液,头发试样中基体元素对测定硒的干扰.三 校准曲线法与标准加入法结果比较在拟定的最佳条件下, 准曲线法和标准加入法 (图 1),对试
8、样进行了测试.实验表明,尽管血液,头发试样中含有较复杂的基体元素,但用上述两种校准曲线所求得硒的含量是一只的.从图 1 可以看出,三种校准曲线的斜率基本相同,回归分析后,相对系数均在 0.9998 以内.这也证明, 血液,头发中的基体元素对硒的测定均无影响.四 本法的回收率及精密度在血液,头发试样中分别添加硒标准,按试样处理步骤处理后进行测定,其回收结果见表 2.五个平行样品的测定,方法的精密度在 1.24.8%以内.经过分析商业部食品检测科学研究所提供的一级标准物质(GBW08551)猪肝中的硒含量,标准值为 0.94+0.05 ugg-1 ,本法测定值为 0.93+0.04 ugg-1 ,
9、准确度是令人满意的.表 2 硒的回收率样品 原含 Se 量(ppb) 加入 Se 量(ppb) 测得 Se 量(ppb) 回收率(%)空白 - 100 100 100血液 A 144.4 100200241.3347.896.9102血液 B 246.0 200300442.8544.998.499.6头发 C 356.6 100200457.5548.010195.7头发 D 665.1 200300864.69590299.898.0五 应用用本法测定人体全血(177 例)头发(327 例) 中硒的含量,其结果与文献报道值相近 (411) .结果见表 3.表 3 人体全血,头发硒平均水平样品 分析例数 范围 (ppb) 平均值 (ppb) 文献值 (ppb)血液 177 41.3483.9 173.6 170(4) 125(5)144(6) 171(7)150(8)头发 327 226.31590.0 722.0 670(8) 740(10)930(11)
