扩增基因全长实验技术获取基因全长简介 基因初步验证 基因全长获取（RACE 技术） RACE 产物鉴定 4123以介绍5RACE 技术为主5对序列进行生物信息学分析 目录v 为什么要获取基因全长？v 什么是EST ？v 获取基因全长基本流程？ 获取基因全长简介EST (Expressed Sequence Tag) 表达序列标签是从一个随机选择的cDNA 克隆，进行5 端和3端单一次测序挑选出来获得的短的cDNA 部分序列, 代表一个完整基因的一小部分, 在数据库中其长度一般从20 到7000bp 不等, 平均长度为360 120bp 。 获取全长cDNA 是研究基因功能的关键，是进行基因功能及产物分析的必要前提。获取基因全长基本流程构建数据库筛选EST 序列普通PCR 进行初步验证RACE 技术生物信息学分析库筛选EST基因初步验证获取基因全长进行全序列分析以本实验室具体情况为例子生物信息学分析1. Blast 比对2. ORF 比对3. 相似序列多重比对4. 家族成员多重比对PCR 扩增凝胶回收测序 设计引物 提取RNA 反转录PCR 扩增电泳检测凝胶回收电泳检测克隆uPCR 产物
