实验九,十实验九,十大肠杆菌感受态细胞的大肠杆菌感受态细胞的制备和转化制备和转化 分子生物学2008实验2010 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需将对数生长期的细菌(受体细胞)经理化方法处理后,细胞膜的通透性发生暂时性改变,成为能允许外源DNA分子进入的细胞,称感受态细胞。一. 实验原理1.概念感受态细胞分子生物学2008实验2010转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。 转化分子生物学2008实验2010 转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体,它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。 受体细胞经过一些特殊方法(如物理制备法,化学制备法等)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Comp