精选优质文档-倾情为你奉上由于Taq DNA聚合酶是目前PCR反应体系中应用最广泛的酶,因此此文主要讨论使用该酶的PCR反应体系。A 镁离子浓度镁离子是热稳定DNA聚合酶的辅因子,其浓度对PCR至关重要。模板DNA的浓度,鳌合物(如EDTA和柠檬酸盐)、dNTP浓度和蛋白都会影响反应体系中游离镁离子的量。如果游离的镁离子含量不够,那么Taq DNA聚合酶则无法行使功能(figure1)。过多的游离镁离子则会降低酶的保真度,可能会增加非特异性扩增。因此,研究者应当根据实际的实验结果来优化每一反应中镁离子的浓度。可以用一系列的镁离子浓度梯度来验证,镁离子浓度范围为14mM,每次增加或降低0.51 mM。扩增产量最高,非特异性产物最低时的镁离子浓度即为最优。最优镁离子的浓度范围跟DNA聚合酶的类型相关,例如,Pfu DNA 聚合酶似乎对镁离子的依赖性更低,但其优化范围通常为26mM。许多DNA聚合酶产品提供Mg-free reaction buffer和单独一管25mM MgCl2,这样就可以自行调节Mg2+浓度,优化反应体系。MgCl2溶液在反复冻融后会出现浓