沉淀反应在动物检验检疫中的应用.DOC

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1、沉淀反应在动物检验检疫中的应用可溶性抗原与抗体结合,在两者比例合适时,可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物,这种抗原-抗体反应称为沉淀反应(precipition reaction)。沉淀反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散。即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散,在比例合适处相遇时形成可见的白色沉淀。(1)单向免疫扩散 (single immunodiffusion) 单向免疫扩散试验是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中,倾注于玻片上,制成含有抗体的琼脂板,在适当位置上打孔,将抗原材料加入琼脂板的小孔内,让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散,与琼脂中

2、的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散,出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度呈正相关。取已知量抗原绘制标准曲线,可根据所形成沉淀环的直径,从标准曲线中查出待检标本的抗原含量。本方法简便,易于观察结果,可测定抗原的灵敏度(最低浓度) 约为 10-20ugml。(2)双向免疫扩散 (double immunodiffusion) 将抗原与抗体分别加于琼脂凝胶的小孔中,二者自由向四周扩散,在相遇处形成沉淀线。若反应体系中含两种以上抗原-抗体系统,则小孔间可出现两条以上沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性检测、组成和两种抗原的相关性分析。(3)免疫电泳 (i

3、mmunoelectrophoresis) 先将待检血清标本作琼脂凝胶电泳,血清中各蛋白组分被分为不同区带,然后按电泳方向平行挖一小槽,加入相应抗血清,与已分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散,在各区带相应位置形成沉淀弧。对照正常血清形成的沉淀弧数量、位置和形态,可分析标本中所含抗原成分的性质和含量。(4)免疫比浊 (immunonephelometry) 当抗体浓度高,加入少量可溶性抗原,即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物,它可使通过液体的光束发生散射,随着加入的抗原增多,形成的免疫复合物也增多,光散射现象也相应加强。免疫比浊法(immunone phelomytry)就是在一定的抗体浓度下,加入一定体积的样品,经过一段时间,用光散射浊度计(nephelometry)测量反应液体的浊度,来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便,可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。

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