1、1植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚 Trolox 的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2 -）
2、 、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2） 、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH -） 、过氧化基（ peroxyl radical；ROO -） 、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO） 、烷氧自由基（alcoxyl radical） 、氮氧基（nitric Oxide ；NO -） 、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO -）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl） 、半醌自由基（semiquinone radical） 、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactiv
3、e Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER） 、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾（potassium persulfate ）氧化2,2-连氮- 双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸） （2
4、,2-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的 ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基或者消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。产品内容缓冲液（Reagent A） 毫升染色液 A（Reagent B1） 管染色液 B（Reagent B2） 毫升氧化液（Reagent C） 毫升标准液（Reagent D） 微升产品说明书 1 份保存方式保存在20冰箱里，有效保证 6 月用户自备1.5 毫
5、升离心管：用于样品存放和标准品配制的容器4微型台式离心机：用于样品处理296 孔板：用于比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色变化实验步骤一、样品准备选择一：血浆样品1 准备好肝素或 ACD 抗凝管（注意： 避免使用 EDTA 抗凝管 ）2 抽取 1 毫升血液，置于抗凝管里3 放进 4微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 700g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）4 小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管此为血浆成分（注意： 避免触碰白色液体层 ）5 即刻置于冰槽里备用或放进70冰箱里保存6 移取 10 微升上述制备的血浆到新的 1.5 毫升离心管7 加入 x
6、x 微升 缓冲液（Reagent A） ，混匀8 放在冰槽里待测选择二：血清样品1 准备好不含抗凝剂的储存管 2 抽取 1 毫升血液，置于储存管里3 室温下，静置 30 分钟，直至血液凝结4 放进 4微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 2000g（或 5000RPM，例如 eppendorf 5415）5 小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管此为血清成分（注意： 避免触碰白色液体层 ）6 即刻置于冰槽里备用或放进70冰箱里保存7 移取 10 微升上述制备的血清到新的 1.5 毫升离心管8 加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A） ，混匀9 放在冰槽里待测选择三：尿液/脑脊液
7、/唾液/精液样品 1 准备好 1.5 毫升离心管2 移取 1 毫升液体到离心管 3 放进 4微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 700g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）4 小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管 5 即刻置于冰槽里备用或放进70冰箱里保存6 移取 10 微升到新的 1.5 毫升离心管7 加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A） ，混匀8 放在冰槽里待测二、标准液准备1 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管2 移取 xx 微升 标准液（Reagent D）到 1 号管3 小心移取 xx 微升 缓冲液（Reagent A
8、）和 xx 微升 标准液（Reagent D）到 2 号管，混匀4 小心移取 xx 微升 缓冲液（Reagent A）和 xx 微升 标准液（Reagent D）到 3 号管，混匀35 小心移取 xx 微升 缓冲液（Reagent A）和 xx 微升 标准液（Reagent D）到 4 号管，混匀6 小心移取 xx 微升 缓冲液（Reagent A）到 5 号管7 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号 缓冲液（Reagent A） 标准液（Reagent D） 测定体系标准 Trolox 浓度1 xx 微升 xx 微升 xx 微摩尔/升2 xx 微升 xx 微升
9、xx 微摩尔/升3 xx 微升 xx 微升 xx 微摩尔/升4 xx 微升 xx 微升 xx 微摩尔/升5 xx 微升 0 0三、 样品测读实验开始前，将20冰箱里的试剂置于室温下融化，移取 xx 毫升 染色液 B（Reagent B2）到 1 管 染色液 A（Reagent B1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16 小时）后，标记为 染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。1 准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔2 分别移取 xx 微升 缓冲液（Reagent A）到 96 孔板里的每个孔里3 分别加入 xx 微升 染色工作液 4 分别加入 xx 微升 氧
10、化液（Reagent C）5 加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A）到空白对照孔6 加入 xx 微升上述配制的 标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里7 加入 10 微升体液样品到样品孔里8 轻轻摇动 96 孔板，使其混匀9 室温下孵育 1 分钟10 即刻放进酶标仪里测读：730nm 波长11 分析结果：1） 构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为吸光单位（OD730nm） ；横座标（X 轴）为标准 Trolox 浓度（微摩尔/升）2） 空白对照孔为最大吸光单位（OD730nm）读数3） 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD730nm）读数 4） 根据标准曲线获得样品对应 Trol
11、ox 浓度（微摩尔/升）5） 计算样品实际总抗氧化能力 6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）7） IC50：50抑制率所需的样品单位：TROLOX 等值或样品蛋白浓度（毫克/毫升）或样品容量（微升）4注意事项1 本产品为 50 次操作2 本产品测试范围为高浓度 30 至 150 微摩尔3 操作时，须戴手套4 体液制备的所有操作均须在 4状态下进行5 测试前，样品须处于新鲜收集6 样品须清澈7 样品避免含有 Tris、EDTA 和还原剂等8 空白对照孔的吸光读数应为 2.0 以上，如果低于 1.5，不能用于高浓度检测，须增加 染色工作液的室温孵育时间9 染色工作
12、液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为 3.5 以上，建议使用无离子水稀释到 2.5 至 3.0 则可10样品读数越低，抗氧化能力越高11样本量不宜超过 20 微升12可以使用比色皿检测13如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品浓度 14如果测试样品很多，建议使用排枪移液15如果用户没有 730nm 波长滤波器，可以使用 640nm 至 810nm 之间的任一波长替代；或者使用 405nm波长替代16人体体液的总抗氧化能力在 0.2 至 2 毫摩尔标准水溶性生育酚 Trolox 的浓度17本公司提供低浓度测试试剂产品18本公司提供系列抗氧化分析试剂产品质量标准1 本产品经鉴定性能稳定2 本产品经鉴定检测敏感
