精选优质文档-倾情为你奉上细胞总蛋白的提取及裂解液一悬浮细胞计数107重悬于0.5mlPBS(0.01M)中，加入饱和浓度一抗(1/10)或（10ug/ml）415-30min后，短暂离心4000 转3分，用PBS 0.4-0.5ml重悬(室温),加入饱和浓度二抗（1/100）或 (20ug/ml),迅速置于37水浴中2-5分后（迅速加入终止液0.5ml（冷pbs中含有400uM Na3VO4,5mM EDTA,10mM NaF）,离心4000 转3分，弃上清,置于冰浴中,加入裂解液0.2-0.3ml(裂解浓度108/ml？)吸管轻轻混匀，冰点缓慢震摇孵育30分钟后加入10ul浓度为10mg/ml的PMSF储存液，冰点孵育30分钟。4度离心15000g 20min。上清液即为全部细胞溶解成分。二裂解缓冲液：50mM Tris-HCl pH7.6 或20mM Hepes pH7.4150-300mM NaCl1(w/w)NP-40 (0.5%Triton-X100)5mM EDTA（现加1ml加10ul）临用前加入蛋白酶抑制剂：
