1、细胞转染技术一 ：转染的简介二 ：转染的分类三： 转染的方法一 、 转染的简介1.基因转染 :将具生物功能的 核酸 转移或运送到细胞内并使 核酸 在细胞内维持其生物功能。转染的 DNA： cDNA,基因组 DNA，有目的基因的质粒 DNA。2.基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究和基因治疗研究。不表达 表达； 表达 不表达二 、转染的分类瞬时转染 稳定转染目的 快速分析 为获得稳定表达外源基因的单细胞克隆 目的 DNA与宿主染色体未整合 整合表达持续时间 随细胞分裂而稀释至丢失 48 72小时 随宿主 细 胞本身基因 组 一 样 复制， 转录 ，翻 译 ，并被 稳 定 遗传 筛选办法 抗生素
2、抗性 抗生素抗性基因转染真核细胞的方法转染方 法化学转染法物理转染法病毒感染法DEAE一葡聚糖法显微注射法 逆转录病毒磷酸钙法 电穿孔法 腺病毒人工脂质体法 基因枪法是最早应用哺乳动物细胞转染的试剂之一。 DEAE-葡聚糖是阳离子多聚体 ,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取。 DEAE一葡聚糖转染已成功地应用于瞬时转染，但用于稳定转染却不可靠。DEAE-葡聚糖法磷酸钙共沉淀转染法由于试剂易得、价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究。原理是，先将外源性 DNA和氯化钙混合，然后加入到含磷酸离子的缓冲液，在特定 PH下（通常 PH7.1），慢慢形成 DNA-磷酸钙沉淀，后把含有沉淀的混
3、悬液加到培养的细胞中，培养一段时间后，通过胞膜的内吞作用摄入 DNA。脂质体介导法（目前应用最广泛）原理：阳离子脂质体试剂与 DNA混合后，形成一 种稳定的脂质双层复合物， DNA被包在脂质体中间，这种脂质双层复合物可直接加到培养的细胞中，脂质体粘附到细胞表面并与细胞膜融合， DNA被释放到胞浆中。【 主要应用 】 :瞬时转染 稳定转染 . 【 特点 】 ：使用方法简单， 可携带大片段 DNA，通用于各种类型的裸露 DNA或 RNA， 能转染各种类型的细胞，没有免疫原性 。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，很大程度上应用受限制。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此 脂质体与质粒的比例 ， 细胞密度以及转染的时间长短 和 培养基中血清的含量 都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
