1、z第第 19章：分子生物学常用技术章：分子生物学常用技术 4学时学时y分子杂交、分子杂交、 PCR、基因测序、基因测序y蛋白质研究技术蛋白质研究技术 (双向电泳，酵母双杂交双向电泳，酵母双杂交 )y基因转移与基因剔除基因转移与基因剔除 (含含 RNA干扰干扰 )z第第 20章：基因工程章：基因工程 4学时学时z第第 21章：基因诊断与基因治疗章：基因诊断与基因治疗 4学时学时第四篇：分子生物学技术与应用第四篇：分子生物学技术与应用第十九章第十九章分子生物学常用技术分子生物学常用技术分子生物学技术能帮助我们干什么？分子生物学技术能帮助我们干什么？z揭示生物大分子揭示生物大分子 (DNA、 RNA
2、、蛋白质、蛋白质 )的结构与功能的结构与功能yDNA 水平：基因序列分析、拷贝数和染色体定位水平：基因序列分析、拷贝数和染色体定位yRNA 水平：定量分析、基因表达产物的可变剪接分析水平：定量分析、基因表达产物的可变剪接分析y蛋白质蛋白质 水平：蛋白质定量、定位、功能水平：蛋白质定量、定位、功能y细胞细胞 与与 整体整体 水平：基因在活体中的功能水平：基因在活体中的功能z目的：了解疾病发生的规律，提供治疗与预防手段目的：了解疾病发生的规律，提供治疗与预防手段我们需要了解和掌握哪些基本技术？我们需要了解和掌握哪些基本技术？z基本技术：基本技术：y核酸：测序、印迹、杂交、体外扩增技术核酸：测序、印
3、迹、杂交、体外扩增技术y蛋白质：电泳与印迹、组学技术、相互作用蛋白质：电泳与印迹、组学技术、相互作用z综合技术：综合技术：y基因工程技术基因工程技术y转基因生物与基因敲除技术转基因生物与基因敲除技术z应用技术：应用技术：y基因诊断基因诊断y基因治疗基因治疗zMolecular hybridization:利用已知核酸序列利用已知核酸序列 (探针探针 /probe) 检测与其互补的检测与其互补的未知核酸序列未知核酸序列z用途：用途：y确认核酸序列间同源性确认核酸序列间同源性y对特定核酸序列进行定量对特定核酸序列进行定量y自核酸混合体中辨认特定核酸序列自核酸混合体中辨认特定核酸序列第一节：核酸分子
4、杂交第一节：核酸分子杂交一、基本原理一、基本原理变性变性 (denature)复性复性 (renature)杂交杂交 (hybiridization)核酸核酸 变性变性z在特定变性因素作用下，在特定变性因素作用下， DNA双螺旋解离的过程双螺旋解离的过程z破坏氢键与疏水作用可导致变性破坏氢键与疏水作用可导致变性热变性：热变性： 高温高温 可使核酸变性，温度高于可使核酸变性，温度高于 90 时任时任何核酸双链都将变性何核酸双链都将变性酸碱变性：酸碱变性： pH11 时核酸将变性，时核酸将变性， DNA 使用碱变性使用碱变性 ， RNA 则不可则不可化学试剂变性：能够破坏氢键的化学试剂如化学试剂变
5、性：能够破坏氢键的化学试剂如 尿素尿素或或 甲酰胺甲酰胺 可使核酸变性可使核酸变性变性温度变性温度z Tm： melting temperature，解链温度或变性温度，解链温度或变性温度z影响变性温度的因素：影响变性温度的因素：y溶液的离子强度溶液的离子强度x变性温度与离子强度变性温度与离子强度正相关，低盐利于变性正相关，低盐利于变性yDNA分子的分子的 GC 含量含量xGC (Tm 69.3)2.24核酸复核酸复 性性z变性的变性的 DNA 单链相互识别并结合，恢复其天然双单链相互识别并结合，恢复其天然双螺旋结构的过程螺旋结构的过程z复性类似与化学反应，需要一定反应时间复性类似与化学反应，需要一定反应时间影响影响 DNA 复性速度的因素复性速度的因素zDNA 分子的浓度：浓度高，复性快分子的浓度：浓度高，复性快zDNA 分子的长度：长片段复性速度慢分子的长度：长片段复性速度慢zDNA 分子的复杂性：重复序列复性速度快分子的复杂性：重复序列复性速度快不同物种不同物种 C0t曲线比较曲线比较 人类基因组人类基因组 C0t曲线曲线
