荧光定量PCR的原理及其应用蒋昌龙荧光定量PCROutline 荧光定量PCR的原理 荧光定量PCR应用PCR 反应过程5533d.NTPsTaq 酶Primers5 35 35 35 35 35 35 35 3反应组分变 性5 35 35 35 35 35 3延 伸5 35 35 35 335 3TaqTaq55重 复退 火5 35353 5355 335 353循环24个拷贝循环38个拷贝53 535 3535 3535 3535 3535 33 55 3535 353Cycle #TheoreticalReal LifeLog Target DNAPCR反应模式 同一样品96复孔的实验结果荧光定量PCR 原理缺憾u无法对初始模板精确定量u无法实时监测扩增情况u跑胶繁琐、易污染常规PCR 电泳鉴定 荧光定量PCR 在体系中引入荧光染料 实时检测 扩增阶段： 指数期 平台期荧光定量PCR 原理荧光定量PCR 原理Threshold lineC(t) value 阈值：荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准 C(t)值：荧光信号到达阈值时所经过的扩增循环次数荧光定量PCR 原理X
