蛋白质电泳技术介绍ppt课件.ppt

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LOGO电泳技术介绍SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis ,PAGE)基本原理1.SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂。2.蛋白质样品在100用SDS和还原剂处理,可解聚成亚基,加入SDS,改变了蛋白质的构象。3.各种SDS-蛋白质复合物均带相同密度的负电荷,其荷电超过了原蛋白质,消除了不同蛋白质的荷电差异。图解多孔凝胶混合大分子电泳操作流程制胶上样电泳染色脱色v制胶v1将玻璃板用蒸馏水洗净晾干,把玻璃板在灌胶支架上固定好v2 按照配方制备分离胶,TEMED在灌胶前加入混匀,迅速灌胶v3 在分离胶上迅速并轻柔的加上水或无水乙醇进行水封(凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面)v4 倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干,按比例配好浓缩胶,连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm处,迅速插入样梳,静置40分钟具体步骤v上样按一定顺序在加样孔中加入样品,根据SDS-PAGE电泳玻璃板间隙厚度不同,选择加入样品量。v电泳打开电源将电压调到80v(一般15min左右),

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