1、遗传病的分析 4基因组 DNA提取与 PCR扩增技术一、基因组 DNA提取实验目的 基因组 DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组 DNA提取的基本方法。原 理DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等，破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。DNA、 RNA所含有的嘌呤环和嘧啶环的共轭双键具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在260nm处，所以，可用紫外分光光度法测定DNA的浓度。原理基因组 DNA提取试剂盒：在高盐的状态下， DNA纯化树脂专一性地吸附 DNA；而在低盐或水溶液状态下， DNA被洗脱下来。器材与试剂 台式
2、高速离心机、天平、水浴恒温箱、移液枪、塑料离心管等 试剂盒（纯化树脂、 GN结合液、漂洗液、无水乙醇、离心纯化柱 ）、 TE缓冲液 操作1、将全血轻轻混匀，转移 0.5ml全血到 1ml纯化树脂中，颠倒混匀 5-6次，室温， 3min。其间要颠倒混匀 1次， 5000r/min离心 3sec；2、取沉淀，加 1mlGN结合液悬浮沉淀，颠倒混匀， 5000r/min离心 3sec；3、取沉淀，加 0.5ml漂洗液纯化树脂 2次，颠倒混匀， 5000r/min离心 3ecs；4、取沉淀， 加 0.8ml无水乙醇悬浮沉淀，颠倒混匀；装入离心纯化柱， 12000r/min离心 1min，弃乙醇液；5、
3、空柱再 12000r/min离心 1min，进一步弃乙醇液；6、取离心好的纯化柱套入一干净的 1.5ml离心管中，加入 100ul TE缓冲液于纯化树脂上（不能粘在管壁上），室温下放置 3min， 12000r/min离心 2min。注意事项 一般情况下，纯净的 DNA OD260/OD280比值约为 1.8， RNA为 2.0。若样品中含蛋白质，则比值下降，必要时需重新抽提。若 DNA的比值1.75，则加入 SDS至 0.5%； 从核酸中去除蛋白质时，常用到酚：氯仿等体积混合液。氯仿的作用是使蛋白质变性并有助于水相和有机相的分离； DNA用 TE溶解，可增加 DNA的稳定性，便于长期保存。二、 PCR扩增技术实验原理 多聚酶链反应（ PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。可简述为： 在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板 DNA，四种脱氧核苷酸（ dNTP），和耐热 Taq聚合酶及两个合成的 DNA引物，并有 Mg2+存在。
