1、 作者简介 何凌云 08 级药剂学博士研究生， 主要从事中药新剂型新制剂研究。 *通讯作者 刘汉清 博导 主要从事药物新剂型新制剂研究 Email: Tel:025-85811517 瓜蒌薤白颗粒的质量标准研究 何凌云 1， 陈彬辉 2， 刘汉清 1* （ 1 南京中医药大学，南京 210046； 2 南京艾德凯腾生物医药有限责任公司 南京 210012） 摘要 ： 目的： 制定瓜蒌薤白颗粒的质量标准 。 方法： 采用高效液相色谱法测定制剂中的薤白皂苷 B 含量 。 结果： 薤白皂苷 B 的回归方程 Y 1.4463X 4.9165，相关系数 0.9996，线性范围为 1.095 g 17.5
2、2 g。 平均回收率 97.85%， RSD=1.86%。 结论： 薤白皂苷 B 的测定方法稳定，重现性好 。 关键词： 瓜蒌薤白颗粒 ； 薤白皂苷 B； 高 效液相色谱法 Quality Standards for Gualouxiebai Granules HE Ling-yun1, CHEN Binhui2,LIU Han-qing1* (1Nanjing University of TCM, Nanjing 210046； 2Nanjing NMG-ADDS Co. , Ltd. Nanjing 210012) Abstract:Objective:To establish the m
3、ethod for quality control of Gualouxiebai Granules.Methods: The macrostemonoside B in this medicine was determined by HPLC.Results: The regression equation of the macrostemonoside B was Y 1.4463X 4.9165 ,the linear range was 1.095 g 17.52 g, 0.9996.The average recovery was 97.85%with RSD of1.86%.Con
4、clusions: The method can be applied to the quality control of Gualouxiebai Granules. Key words: Gualouxiebai Granules; macrostemonoside B; HPLC； 瓜蒌薤白颗粒原方出自东汉名医张仲景的金匮要略，具有通阳散结、行气祛痰之功，是中医宣痹通阳法治疗胸痹的代表方，近三十多年来国内外对该方中瓜蒌、薤白的化学及药理进行了较为系统的研究，活性测试结果表明薤 白中的皂苷类成分具有强烈的抗血小板聚集活性 1、 5。 为控制制剂质量，我们选用薤白皂苷中的代表成分 薤白皂苷
5、B 作为含量测定的指标成分。为瓜蒌薤白颗粒中薤白皂苷 B 的含量测定建立了一种稳定性好、分离效率高的分析方法。 1. 仪器与实验材料 1.1 仪 器 日本岛津高效液相色谱仪 SPD-10A； Alltech 500 型蒸发光检测器检测； BS10S 型电子分析天平 ； KQ-500E 型医用超声清洗器 (昆山超声仪器有限公司 )； EYELA 旋转蒸发器 。 1.2 实验材料 对照品 薤白皂苷 B（ macrostemonoside B） 对照品 (归一化法测定 纯度 98.5%)，自制 。 供试品 瓜蒌薤白颗粒（本单位自制），批号： 090423、 090508、 090518 试剂 甲 醇
6、（ 色谱纯 ） 、 重蒸水 等。 3.含量测定 3.1 色谱条件 ： 蒸发光散射检测器；漂移管温度 95；载气流量 2.24 SLPM；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 -水（ 70： 30）为流动相；理论板数按薤白皂苷 B 峰计算应不低于 3000。 3.2 溶液的制备 3.2.1 供试品溶液的制备： 取本品 4 袋，研细， 80减压干燥至恒重后，精密称取 25 g，加入甲醇 250 mL， 80水浴回流提取 1 h，放冷，滤过，滤液蒸干后用甲醇定容到 10 mL，摇匀，即得。 3.2.2 对照品溶液的制备 ： 精密称取在 80减压干燥至恒重的薤白皂苷 B 对照品 10 mg，用 甲醇定
7、容到 10 mL；精密吸取上述溶液适量，分别加甲醇制成每 1 ml 含 0.2 mg 和每 1 ml含 0.4 mg 的两种对照品溶液。 3.2.3 阴性对照溶液的制备：取阴性样品（不含薤白的药材按照“制法”项下方法制备的颗粒） 25 g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下方法依法制备成阴性样品溶液 。 3.3 专属性实验：分别吸取上述对照品溶液、供试 品溶液、阴性对照溶液 10 L 测定，记录色谱图，可见阴性对照对测定无干扰。 3.4 标准曲线的制备：取在 80减压干燥至恒重的薤白皂苷 B 对照品 18 mg，精密称定，用甲醇定容到 10 mL，得浓度为 1.752 mg.mL-1 的对照
8、品溶液；将上述对照品母液分别倍量稀释，得到浓度为 0.876,0.438,0.219,0.1095 mg.mL-1 的对照品溶液。精密吸取上述各对照品溶液 10 L 注入液相色谱仪，按上述“色谱条件”测定。以峰面积（ A）的自然对数值为纵坐标（ Y lgA），以进样量（ m）的自然对数值为横坐标（ X lgm），绘制标准曲线，经统计学计算，得其线性回归方程为 Y 1.4463X 4.9165，相关系数 0.9996，线性范围为 1.095 g 17.52 g。 13.41301020304050607080901 0 0mV2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 m i n
9、A - 1 00102030405060708090mV2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 m i n B 1.9234.1284.4125.9217.2387.8898.35311.47313.38419.10320.68327.938- 1 00102030405060708090mV2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 m i n C 图 1 薤白皂苷 B HPLC 图 A 对照品 B 阴性 空白 C 样品 3.5 精密度考察 ：精密吸取对照品溶液（浓度 0.438 mg.mL-1） 10 l，连续进样 6 次，按上述“色谱条件”测定峰面积，计算
10、 RSD1.09%，说明精确度良好。 3.6 稳定性试验 ： 取样品 25 g, 按照“供试品溶液的制备”项下方法依法制备成供试品溶液， 间隔一定时间分别进样 10 l 进行测定，共计进样 6 次，测定其稳定性。统计结果表明，峰面积的 RSD 为 2.35%，表明样品溶液在 12 h 内 稳定。 3.7 重复性考察 ： 取瓜蒌薤白颗粒（批号： 090423） 6 份各 25 g，按照“供试品溶液的制备”项下方法依法制备成样品溶液，每份连续进样 3 次，每次 10 l。薤白 皂苷 B 含量平均值为 0.1511 mg.g-1， RSD=2.47%，说明本方法重现性良好。 3.8 加样回收率试验
11、： 取 样品适量 , 精密称定， 分别准确 加入 薤白 皂苷 B 对照品 ， 按 上述 含量测定方法测定，计算回收率 为 97.85%， RSD=1.86%，结果见表 1。 表 1 薤白 皂苷 B 加样回收率试验 取样量 /g 样品中含量/mg 对照加入量/mg 测得总量/mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/% 12.5037 1.8893 1.5056 3.3597 97.66 97.85 1.86 12.4462 1.8806 3.3144 95.23 12.5132 1.8907 3.3640 97.85 12.5083 1.8900 1.8820 3.7077 96.58 1
12、2.5044 1.8894 3.8010 101.57 12.4642 1.8833 3.7132 97.23 12.4985 1.8885 2.2584 4.1134 98.52 12.5067 1.8898 4.1448 99.85 12.4845 1.8864 4.1236 99.06 3.9 样品 含量测定： 分别取不同批号的瓜蒌薤白颗粒（批号： 090423,090508 和 090518），按照“供试品溶液的制备”项下方法依法制备成样品溶液，按上述色谱条件测定成品的含量，分别为0.15,0.15,0.14 mg.g-1。 4.讨论 4.1 薤白皂苷 B 为小根蒜和薤中均含有的化合物
13、 7，且具有较好的抑制血小板聚集的活性，本文以薤白皂苷 B 为含量测定指标，首次系统研究其 HPLC 含量测定的方法学，为薤白制剂的研究开发提供了基础。 4.2 薤白皂苷 B 为紫 外末端吸收的物质， 检测时基线信噪比较大，基线不稳，且重现性差， 所以选用蒸发光检测器 （ ELSD） 检测 ,结果表明该方法精密度高，重现性好，适用于薤白皂苷 B 的含量测定 。 4.3 瓜蒌薤白颗粒 处方 中 仅 有 2 味药，薤白采用 HPLC 定量研究 ，方法操作简便，精确 。 参考文 献 1 彭军鹏 ,吴雁，姚新生等 .薤白中两种新甾体皂甙成分 J.药学学报 ,1992,27(12):918-922. 2
14、 Matsuura, Hiromichi; Ushiroguchi, Tsuyoshi; Itakura, Yoichi.A Furostanolglycosides from Allium chinense G.DonJ.Chem Pharm Bull,1989,37:1390-1391 3 姜勇，王乃利，姚新生等 . 薤的抗凝和抗癌活性成分的结构鉴定 J. 药学学报 ,1998,33(5):355-361 4 Kuroda, Minpei; Mimaki, Yoshihiro; Kameyama, Akio.Steroidal saponins from Allium chinense and their inhibitory activitieson cyclicAMP phosphodiesterase and Na+/K+ATPaseJ.Phytochemistry,1995,40(4):1071-1076 5 何祥久，邱峰，姚新生瓜蒌薤白白酒汤活性成分研究 ( )：呋甾皂苷类成分 J.沈阳药科大学学报， 2003； 20（ 2）： 107 110. 6 中国药典 S（一部） 2005，附录 31. 7 姜勇，王乃利，姚新生 .中药薤白的研究进展 J.天然产物研究与开发 .2000,12（ 5）：74-79.
